CCK-8比色法检测细胞活性的简介
CCK-8（Cell Counting Kit-8）是一种常用的细胞增殖和细胞毒性检测试剂盒。它可以用来评估细胞增殖能力和细胞活性，以及检测药物或其他化学物质对细胞的毒性作用。
检测指标
CCK-8试剂主要用于测定细胞的数量和活力。它的核心成分是WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫代嘧啶基)-2H-四唑），这种化合物在细胞内被细胞中的脱氢酶还原，产生橙黄色的可溶性甲氧基-4-硝基苯基氧化型四唑（formazan），该物质的量可以通过光度计在450 nm的波长下测定。产生的formazan染料量与细胞数成正比，因此可以通过测定formazan的量来间接测定细胞的活性和数量。
意义
- 细胞增殖：可以用来评估细胞在特定条件下的生长速率，例如在添加生长因子或其他促进增殖的物质后的细胞增殖情况。
- 细胞毒性：可以评估某些药物或毒素对细胞的毒性效应，是药物开发和安全性测试中的重要工具。
- 优化培养条件：通过比较不同培养条件下的细胞活力，可以帮助优化实验条件。
操作步骤
- 细胞接种：将细胞以适当的密度接种在96孔板中。
- 处理样本：按需对细胞进行处理，例如添加药物。
- 添加CCK-8试剂：通常每孔添加10%的CCK-8试剂，然后孵育一段时间。
- 孵育：将细胞和CCK-8试剂一起孵育1-4小时，具体时间取决于细胞类型和实验设计。
- 测量吸光度：使用酶标仪在450 nm的波长下测量孔内的吸光度，以评估细胞的活力。
所需时间
整个过程通常需要几小时到一整天，具体时间取决于细胞类型和实验设置。其中，细胞的接种和处理时间可能会根据实验设计不同而有所变化，而CCK-8的孵育时间通常为1-4小时。
通过使用CCK-8，研究人员可以快速准确地评估细胞的增殖和毒性，这对于生物医学研究和药物开发非常有用。
CCK-8比色法和MTT比色法的差别和联系
CCK-8比色法和MTT比色法都是用来评估细胞增殖和细胞毒性的常用实验方法，它们都利用了细胞内酶的活性来检测细胞的活力。尽管这两种方法有一定的相似性，但它们在实验操作、敏感性、以及方便性方面存在一些重要的差别。
相同点
- 基本原理：两种方法都是基于细胞内的脱氢酶活性，这些酶可以将无色的四唑类前体还原成有色的formazan染料。
- 终点读数：两者都通过测定所形成的formazan染料的吸光度来评估细胞活性，吸光度的大小与细胞的数量和活性成正比。
- 应用范围：都可以用于检测细胞增殖、细胞活性、细胞毒性以及药物筛选等研究。
差别
- 前体物质：
- CCK-8：使用WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫代嘧啶基)-2H-四唑）作为前体，还原后形成可溶于水的橙黄色formazan。
- MTT：使用MTT（3-(4,5-二甲基噻唑-2-yl)-2,5-二苯基四唑溴化物）作为前体，还原后形成紫色的formazan，该formazan是不溶于水的，需要使用溶剂（如DMSO）溶解。
- 操作步骤：
- CCK-8：操作简便，加入CCK-8试剂后直接孵育，无需后续处理即可进行吸光度测定。
- MTT：需要一个额外的步骤来溶解形成的formazan沉淀，通常使用DMSO或其他有机溶剂，这增加了操作的复杂性。
- 敏感性和安全性：
- CCK-8：通常比MTT更敏感，因为WST-8的还原效率高于MTT。此外，CCK-8更安全，不产生有毒的溶剂废物。
- MTT：可能涉及处理有毒的有机溶剂，如DMSO在溶解formazan时的使用。
结论
虽然CCK-8和MTT都是评估细胞活性的有效工具，但CCK-8在操作简便性、敏感性和安全性方面通常被认为优于MTT。然而，MTT由于其成本相对较低和广泛的历史应用，仍然是许多实验室的常用选择。选择哪种方法取决于具体的实验需求、预算和设施条件。
关于Formazan这个词的解释
橙黄色的可溶性甲氧基-4-硝基苯基氧化型四唑是formazan的一种特定形式。在CCK-8试剂中使用的特定化合物是WST-8（2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二硫代嘧啶基)-2H-四唑），它在细胞中被还原后形成的产物称为formazan。这种formazan具有橙黄色，是一种可溶性的染料，可以通过光度计进行测定。
Formazan是一类化合物的总称，它们通常是四唑盐的还原产物，具有多种不同的结构和颜色。在不同的细胞活性检测试剂中，可能使用不同的formazan前体（如MTT、XTT、WST等），生成的formazan颜色和性质也不尽相同。在CCK-8试剂中，生成的formazan是特定的橙黄色形式，用于通过光度法测量细胞的活性。
